原理
材料与仪器
步骤
(a)用PBSA洗培养瓶/皿三次。
(b)加足够的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。
(c)在80%的贴壁细胞从培养表面脱离时，加人MSC培养基。
(d)500g离心6min。
(e)倒掉上清，用冰上预冷的冻存液I重悬细胞。
(f)细胞计数，然后稀释或浓缩细胞到终浓度的2倍。继续将装有细胞的试管放置在冰上。
(g)在冰上边转动试管边缓慢加人等体积的冻存液II。
(h)等量按份加人冻存管。
(i)将冻存管放入程控降温仪。慢速冷冻盒和-80℃冰箱也可用于降低冷却速度。将冻存管放人液氮长期储存。
来源：丁香实验
