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        酶消化法从Wharton胶中分离干细胞

        相关实验:脐带和脐血来源干细胞的培养实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        (a)脐带取材后,可在PBSA中保存1〜24h。


        (b)除去血管,将Wharton胶剪成大约0.5cm的小组织块。


        (c)将剪碎的组织块转移到50mL离心管,用无血清DMEM洗,室温250g离心5min。


        (d)倒掉上清液,将离心后的沉淀物拍散,浸泡在0.1%胶原酶(大约是沉淀物体积的3倍)中,37℃消化16〜18h。


        (e)加人适当体积的PBSA(消化液体积的2倍),室温250g离心5min。


        (f)倒掉上清液,加2.5%胰蛋白酶(大约是沉淀物体积的2倍)37℃处理30min,轻轻搅动。


        (g)加人适当体积的FBS(消化酶体积的10%)中止胰蛋白酶作用。


        (h)用培养基洗。


        (i)用培养基重悬分离得到的细胞,按大约1×103细胞/cm密度将细胞接种到培养瓶中。

        来源:丁香实验

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