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        吖啶橙或溴化乙锭染色

        相关实验:细胞凋亡的形态:生化性质实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1c)将1μL的染色混合液放至12 mm×75 mm的玻璃试管的底部。加入25μL细胞悬浮液,用手腕轻柔地混合。


        2c)将10μL的该混合液放在一干净的显微镜载玻片上,盖上22 mm2的盖玻片。用一 落射光显微镜的40×到60×的干物镜和一适合观察荧光素的滤光片结合起来检查。


        3c)计数至少200个细胞,记录以下四个细胞状态的每一个数值:①有正常核的活细胞 (VN;有结构的亮绿色染色质);②有凋亡核的活细胞(VA;高浓缩或碎片化的亮 绿染色质);③正常核的死细胞(NVN;有结构的亮橙色染色质);④有凋亡核的死细胞(NVA;高浓缩或碎片化的亮橙色染色质)。


        溴化乙锭只能染死细胞。它插入DNA,使DNA呈现橙色;与RNA的结合很弱,呈现出微红色。因此死细胞有明亮橙色的染色质(溴化乙锭远超过吖啶橙),而且,它的细胞质如果有任何残留,就会呈现深红色。


        4c)计算凋亡细胞的百分比(凋亡指数)和坏死的细胞的百分比:


        凋亡细胞%=有凋亡核的细胞总数/计数细胞的总数×100%

        来源:丁香实验

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