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        单链高分子质量载体DNA的制备

        相关实验:将 DNA 导入酵母细胞实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1) 将DNA溶于pH 8.0的1×TE缓冲液,终浓度为10 mg/mL,于4℃搅拌过夜。 因每一次转化需要用200 载体DNA,制备大量的载体DNA Gnig)并于-20℃冻存分装很有用。


        2) 用一个大的超声探头,在75%的最大功率下超声处理DNA 30 s,以降低DNA溶液 的黏度。取1 mg DNA在0.8%琼脂糖凝胶上电泳,检查超声剪切后片段大小的分布。如果有必要,可重复超声处理,直到获得适当的片段大小分布:片段大小范围为2〜15 kb,平均大小约为7 kb。


        3) 用缓冲液平衡酚抽提1次,酚/氯仿抽提1次,最后用氯仿抽提1次。


        4) 加入1/10体积的3 mol/L,pH 5.2的乙酸钠缓冲液,2. 5体积的冰冷100%乙醇沉淀DNA。


        5) DNA沉淀用1×TE缓冲液重悬,最终浓度10 mg/mL。重悬沉淀可能需要在4℃搅拌过夜。


        6) 将载体DNA移至一个Pyre×耐热玻璃烧瓶中,在微波炉中加热煮沸2〜3 min。


        7) 迅速置冰浴中冷却,用无菌试管分装后于-20℃冻存DNA。

        来源:丁香实验

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