相关实验：用插入诱变法分离突变体实验
最新修订时间：2024-05-13
材料与仪器
步骤
来源：丁香实验
相关产品推荐
CheKine™ 土壤蔗糖酶（S-SC）活性检测试剂盒（微量法）
￥416
Recombinant Taq DNA Polymerase Protein，9012-90-2，阿拉丁
￥459.90
N-Boc-Phe-Leu-Phe-Leu-Phe，148182-34-7，≥98%，阿拉丁
￥900.90
YPD Broth with Agar (premixed powder)，阿拉丁
￥327.90
SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（5X）
￥139
推荐阅读
插入实验 insertion experiment
饵诱
电诱性 electronasty
![化 ，总体积为l 〇〇] ul。加 入 l ^gR NaseA，于 37°C下培养几小时。通过加热至65°C ，持 续 20m in使只似1失活。取走10^1，用 1X T 4 D N A 连接酶缓冲液（ 含 ATP) 将溶液稀 释 至 lOOpl。加 人 100U T 4 D N A 连接酶，在室温下过夜培养。 第M 天 通 过 PCR扩增邻近Tn3 转座子的D N A 序列。向 5^1连接后的D N A 溶液中加入： 5^1缺少Mg2+的 10X T 叫聚合酶缓冲液 ljal 25jumol/L 引物 1 ljal 25|umol/L 引物 2 ljul 10m mol/L dNTP 3 2 ^ 蒸馏水 I jlJ T叫 聚 合 酶 （2. 5U ) 利 用 “热启动”规则对分离的基因组D N A 的成功扩增十分重要。我们使用来自 Lum itekk的 “镁热珠” 。这些珠子是含有PCR反应 所 需 的MgCl2的蜡状珠子。每个 PCR反应加人一个蜡状珠子。蜡将会在68°C溶解以释放MgCl2。95°C扩增5mm 后 ，以 下过程循环35次 ： 94〇C lm in 65°C lm in 72〇C 2. 5min0 以 72°C持 续 7mm终止最后一个循环。纯化扩增的D N A 以去除蛋白质、 ^核 苷 酸 链 和 dNTP (在此过程中将提供一个W izardPCR准备试剂盒），使用SEQ引狻对DNA 测序。 • 第1 5 天 统 计 23°C下培养平板上苯菌灵敏感的菌落。使用联网的计算机，提 交 D N A 序列， 与酵母基因组数据库进行比对，检测转座子的定位。 材料](http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2016/08/B1470880576189autp3f62z8png_small.jpg)
