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        基本方案1 通过手术将基因转移到猪的动脉

        相关实验:动脉的基因转移实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.在手术前 2 天,给幼年家猪按 10mg/kg 体重的剂量服用阿斯匹林,并且在整个研究过程中每周一次连续服用 3 次。

        2.按每公斤 6.0 mg Teiazol 和 2.2 mg 甲苯噻嗪(Xylazine) 的量给家猪进行肌肉注射来麻醉,然后插人一根导管,用异氟烷(isofhrane) 来麻醉,直到整个手术完成。

        3.将实验用的家猪准备好,然后用一块布将其盖住,划一条中位线,从它的腹部切开,一直延伸到耻骨。就这样,把猪的表皮和筋膜沿中线切开了。如果是母猪的话,要避免切到它的尿道。从中打开一个空洞,小心地使用牵引器将它的肠放入体内。

        4.用各种各样的器械,将从其头盖骨附近到大腿骨的的动脉血管分离出来。小心地将血管附近的淋巴和附近黏附的组织分开。从水平的角度将血管分离,以避免切到旁边的支血管。

        5.小心分离后,用 2-0 的丝线将分支血管绑好。如果不这样的话,会降低血管中的血压,以至于影响到基因的转移。

        6.把髂骨的尾部用 2-0 的丝绳绑好,用一把精致的剪刀在髂骨的动脉切一个口子,小心地用剪刀将血管扩张,插入一对气囊导管(图 13.1.1)。

        >第 7~9 步是为了诱导血管手术的进行,如果是转基因到普通的血管,直接跳到第 10 步

        7.通过目视镜,进一步地将导管接近气囊的尾部。这个操作需要通过微小的牵引将导管变直。
        基本方案1 通过手术将基因转移到猪的动脉

        8.把管内无菌 PBS 装在压力转换器中,将它的压力调为0并且与球的尾部相连接。按 lcc/1~5 min 的速率在球中不断地充气(缓慢的充气是为了保护受伤的地方。这时压力表的压力大约为 500 mmHg。

        9.导管的中部,两个气囊跨过受伤的血管的地方,将导管慢慢地缩小。

        10.在气囊的尾部充人 1cc 的空气,加人 3~5 ml 的无菌 PBS,将血液冲走。

        11.在导管(0.8 ml) 中加满病毒或非病毒的载体液体或者转入基因的细胞混悬液。

        12.在气囊中充入 Iml 的空气。

        13.在两个气囊之间(0.1~0.3 ml) 血管的伤口处的区域滴满悬液,测量滴入时的压力,不要超过 150 mmHg(猪的血压是 901 mmHg)。整个滴入过程为 20 min,其间要控制住压力。

        14.从近到远,对气囊放气。把导管移开,并用 2-0 的丝绳绑好髂骨的动脉。确保血液的流动正常。

        15.用 1-0 可吸收的缝线将猪的血管和肌肉缝合,再将筋膜缝合,最后将表皮缝合。

        来源:丁香实验

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