方案10 蛋白质阵列：显微镜玻片的制备

一、乙醛玻片的制备

乙醛玻片是一种表面镀有乙醛功能基团的玻璃质的玻片（见图 10.7)。可以从销售商处购买到这种产品，如附属于以生产乙醛制品 SuperAldehydeSubstrates(商品名）闻名的机构 TeleChem Internation，Inc.(Sunnyvale，California)，也可以用下述的方法制备出效果更好的玻片。

1.室温条件下将洁净的纯玻璃片在0.lg/ml 的氢氧化钠水溶液中浸泡 12 h。

实验提示：若需要处理的玻片数目超过 30 片，可使用一个能搁置 30 块玻片的不锈钢样片架和玻璃矩形染碟，这样能使操作更方便。

2.用蒸馏水冲洗玻片后，用 1% 的盐酸（体积分数）再冲洗一次，最后用蒸馏水冲洗两遍。

3.将装有玻片的样片架，放人配有吊桶式转子和微量板支架的离心机中，旋转甩干。离心条件为室温下 200 g 30s。

用离心机甩干玻片，以避免玻片上产生水溃。

4.将 95% 的乙醇和 5% 的水混合后，用乙酸调 pH 至 4.5~5.5(约 0.1% 的乙酸）。

5.边搅拌边加人 3-三乙氧基甲硅烷正丁醛，生成 2% 的硅烷溶液（体积分数）。

6.在室温下，搅拌 3 min，使其充分水解，并形成硅烷醇，将玻片浸入溶液中，室温条件下再孵育 3 min。

7.用无水乙醇稍稍将玻片冲洗一下，而后离心甩干。110°C 真空干燥 IOmin 或室温干燥 24 h。

8.用 95% 的乙醇和 5% 的水的混合溶液冲洗玻片三次，每次 5 min，而后离心甩干。将玻片在室温条件下，保存于真空干燥器或惰性气体中。

二、BSA-NHS 玻片

BSA-NHS 玻片是在显微镜玻璃载片的表面，共价粘连一层小牛血清白蛋白 (BSA) 的玻片。另外，这些 BSA 分子还可以和玻片表面的蛋白质分子发生共价交联反应（见图 10.8)。BSA-NHS 玻片是由乙醛玻片制备成的。这种玻片可以从多个销售商那里购买到（包括 Sigma-Aldrich、Coming 和 TeleChemInternational)，也可以直接用玻片来制备。若使用的是购买来的经乙醛处理过的片子，可直接到第⑤步。

1.用上述①~③步的方法清洗玻片。

2.在 95% 的乙醇和 5%. 的水的混合液中，搅拌加人 3-三乙氧基甲硅烷正丁醛，以形成 3% 的硅烷溶液（体积分数）（注意：不要加人乙酸）。在室温下搅拌溶液 10 min，以保证水解充分及形成硅烷醇，然后将玻片浸入溶液中，在室温下继续孵育 IOmin。

3.用无水乙醇将玻片稍稍冲洗后，在离心机中甩干。110℃ 真空干燥 10 min 或室温下干燥 24 h。

4.用 95% 的乙醇和 5% 的水的混合溶液冲洗玻片三次，每次 5 min，离心甩干。

将玻片在室温条件下保存（最好保存在干燥器中）。

5.将 10.24g N，N’-二琥珀酰亚胺碳酸盐和 6.96 ml N，N’-二异丙基乙胺溶于 400 ml 的乙醛 DMF。

N，N’-二琥珀酰亚胺碳酸盐和 N，N’-二异丙基乙胺的终浓度为 100 mmol/L。

6.将 30 个经乙醛处理过的玻片（从第④步或从商家购买的），于室温下在二琥珀酰亚胺碳酸盐或二异丙基乙胺溶液中，浸泡 3 h。

在 3 h 的孵育过程中溶液颜色会变黄。

7.用 95% 的乙醇和 5% 的水的混合溶液冲洗玻片 2 次。

8.将玻片在室温条件下，于 400 ml 含有 1%BSA 的 PBS(pH7.5) 缓冲液中，浸泡 12 h。

9.用蒸馏水冲洗玻片 2 次，用 95% 的乙醇和 5% 的水的混合溶液冲洗，再用离心机甩干。

10.将 10.24 g100 mmol/L 的 N，N’-二琥珀酰亚胺碳酸盐和 6.96 ml100 mmol/L 的二异丙基乙胺溶于 400 ml 的乙醛 DMF。将玻片在室温条件下，在溶液中浸泡 3 h。

11.用 95% 的乙醇和 5% 的水的混合溶液冲洗玻片，用离心机甩干。

将制备好的玻片于真空干燥器中室温保存，其活力可保持 3 个月以上。