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        克隆和扩增用培养基的制备

        相关实验:单克隆抗体的制备

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

         

        附 加 材 料(其他材料见基本方案 2)

        小鼠(以 BALB/c 小鼠为例), 5 或 6 只 , 4〜6 周龄,无 病 原 体(有可靠来源,避免支原体感染)

        75 cm2 组织培养用细颈瓶

        0.45 过滤装置

        1.用颈椎脱臼法或二氧化碳窒息法处死 5 或 6 只 小 鼠(附 录 2 G; 避免使用麻醉剂)。无菌操作取出胸腺(附 录 2 H) 并 制 成 单 细 胞 悬 液 (见基本方案2 , 步 骤 7〜9)。在20m l 添 加 lOmmol/L HEPES和 lmmol/L 丙酮酸钠的DMEM-20完全培养液中重悬细胞。

        2.加IOml 胸 腺 细 胞 至 75 cm2 组 织 培 养 瓶 中 。以 每 个 胸 腺 20m l 培养基的总量加入DMEM-20完全/HEPES/丙 酮 酸 钠 培 养 液 (最多每个培养瓶 60 ml细胞悬液)。垂直放置 ,培 养 4〜5d

        3.将 细 胞 悬 液 移 至 无 菌 50m l 锥 底 离 心 管 中 。室 温 下 , IOOOg 离 心 5 min,取 上 清 。0 .45 Mm 过滤上清液。以 IOml 为一个单位,一 20°C 冻存。解冻后,以 1 0 % 〜2 0 % 的浓度使用。

        来源:丁香实验

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