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        杂交瘤培养上清的筛选分析

        相关实验:单克隆抗体的制备

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

         

        附 加 材 料(其他材料见基本方案 2)

        在 9 6 孔板中生长的杂交瘤(见基本方案 2)

        添 加 10 mmol/L HEPES的 DMEM-2 0 完 全 培 养 基(附 录 1)

        多道移液器和9 6 孔板,可选的

        1.在倒置显微镜下观察生长的杂交瘤的孔数。确定是对所有孔进行细胞筛选还是只筛选长有杂交瘤的孔。

        2.将生长的杂交瘤在CO2 培养箱中培养≥ 2 d,以使抗体达到饱和滴度。

        3.用微量移液器从每个孔中取IOOmI 培养上清用于检测或筛选分析,如 ELISA (单元1.1 ) 或间接免疫荧光法(单 元 4.1)。 每操作一个孔需更换新的枪头。如果是对所有孔进行细胞筛选,使用多道移液器可以方便地将培养上清移入另一个 9 6 孔板中。注意保持样品的顺序一致,行 、列标签明确。如需对大量样本进行筛选,可以将几个孔的样品合并入一个孔。一般情况下,检测结果中只有小于 1 % 〜5 % 的杂交瘤可以表达具有所需特异性的抗体(此时的抗体还不是单克隆抗体)。

        4.当完成一整块孔板的取样后,用 新 鲜 的 添 加HEPES的 DMEM-20完全培养基培养液填满孔板,再对下一块孔板进行操作(见基本方案 2 , 步 骤 23)。

        来源:丁香实验

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