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        方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验

        相关实验:电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中,在室温下放置让,将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。

        2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。

        3.在预冷的小试管中,将蛋白质溶解于 50ul 过甲酸中(500ug/ml)。

        4.盖上帽子,0°C 孵育混合物 4 h。如果蛋白质不溶,把反应延长到 20 h。

        5.加入 30ul 氢溴酸,去除多余的过甲酸。

        要特别小心,可能会释放出来少量的溴。

        6.用旋转蒸发器或离心冷冻干燥机彻底干燥样品。在浓缩器中加入少量的 NaOH 固体,以去掉多余的溴和甲酸。蒸发干燥约需要 10 min。

        由于许多氨基酸被修饰,推荐用过甲酸氧化的蛋白质用于 S—S/S—H(半胱磺酸)和甲硫氨酸基团(甲硫氨酸砜)的定量分析,而不是序列分析。

        来源:丁香实验

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