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        在含甘油的缓冲液中通过组装/解聚分离微管

        相关实验:分离微管和微管相关蛋白实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 拿到脑组织(小牛或奶牛),以每克组织 0.75 ml PME 的比例进行匀浆。

        2. 匀浆物在 4℃ 以 100000 g 离心 45 分钟。

        3. 转移上清并用等体积 PME-G 稀释。上清在 37℃ 温育 30~40 分钟。

        4. 在 25℃ 以 100000 g 离心 45 分钟收集微管。

        5. 弃掉上清,将紧密成团的微管沉淀物从管底刮下来,加最初匀浆时所用体积 1/4 的 PME,用 Dounce 的匀浆器轻轻打碎沉淀物。

        6. 溶液在冰/水混合物中冰浴 30 分钟使微管解聚;在 4℃ 以 100000 g 离心 45 分钟去掉所有在冰冷的液体中不溶的聚合物。

        7. 重复步骤 3 和 4 来重组装微管(含微管蛋白和微管相关蛋白),在沉淀物上铺足量含 4 mol/L 甘油的(即 PME 和 PME-G 的比例为 1:1 ) PME 缓冲液,贮存以备后用,缓冲液的量是在直着拿管子时正好盖住沉淀物。

        来源:丁香实验

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