• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        通过组装/解聚从缺少组装驱动成分的缓冲液中分离微管

        相关实验:分离微管和微管相关蛋白实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 收集脑组织(几百克)

        (1) 如果从屠宰场取脑(猪)

        ① 只要美国地方检察官允许,在宰杀后尽快收集脑(猪 )。

        ② 把脑一个一个地放在薄塑料袋里,立即浸入冰水混合物中,运到实验室。

        ③ 在冰库里,研究者带着橡胶手套取出脑、表面的血管、血凝块和脑膜。

        ④ 用剪刀把脑剪成小块(1~2 cm),放到冰浴的小烧杯中。

        (2) 如果是买的鸡

        ① 用锋利的剪刀将鸡断头。

        ② 将脑取出放到冰浴的烧杯中。

        2. 每克脑加 1 ml PME,在一个 50 ml 用马达驱动(3000 r/min)的匀浆器中用研杵上下各 7 次进行匀浆。这种匀浆器是玻璃筒,Teflon 研杵;每次处理 20~25 g。

        PME 缓冲液:

        0.1 mol/L PIPES,pH 6.9

        2 mmol/L EGTA

        1 mmol/L MgSO4

        1 mmol/L DTT

        0.5 mmol/L GTP

        3. 匀浆物在 4℃ 以 40000 g 离心 45 分钟。把上清转移到一个新管中,上清里含冰冷的溶解了的微管蛋白二聚体和微管相关蛋白。

        4. 上清在 37℃ 温育 30~45 分钟。

        5. 在 25℃ 以 40000 g 离心 30 分钟收集组装了的微管。用一个 Dounce 的匀浆器,用步骤 2 中使用的缓冲液以 1/5~1/4 的体积重悬所得到的微管沉淀物,重悬的微管放到一个干净的离心管中。

        6. 在冰/水混和物中冰浴 30 分钟。

        7. 在 4℃ 以 40000 g 离心 30 分钟使溶液变清。

        8. 步骤 7 中得到的微管蛋白通过重复步骤 4 和 5 再做一轮组装。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序