• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        从大鼠肝脏中分离高尔基复合体

        相关实验:高尔基体的分离实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 将按要求进用标准食物和饮水的雄大鼠(约 250 g) ,用断头和放血的方法处死。

        2. 切下肝脏(10~13 g ) 并用刀片切碎。

        3. 用一只 Polytron 匀浆器(20 ST 或 10 ST;Brinkman lnslruments) 以 10000 r/min 的频率将每份肝脏在 2 倍体积的匀浆介质中处理 40 秒钟。

        匀浆缓冲液:

        50 mmol/L Tris -马来酸(Tris-maleate),pH 6.4

        0.5 mol/L 蔗糖

        1% 葡聚糖(Sigma,平均分子量 225000)

        4. 将匀浆液于 5000 g 离心 15 分钟,去除大部分上淸,用一只装有橡胶球的大孔巴斯德吸管(内径约 1 mm ) 将沉淀中黄褐色的部分(上部 1/3 ) 重悬于少量的上清中。

        5. 用吸管将悬液吹吸大约 12 次使之混匀,将悬液铺在 1.2 mol/L 蔗糖之上。

        从大鼠肝脏中分离高尔基复合体

        6. 在一只吊篮式转头(Spinco SW50.1 ) 中将管子于 100000 g 离心 30 分钟。

        7. 用一只巴斯德吸管将上清吸出,然后用一只装有橡胶气球的巴斯德吸管将高尔基体的 “毯子”从 1.2 mol/L 蔗糖层上挑起。

        8. 将这部分高尔基体悬于以下中的一种:

        (1) 来自蔗糖梯度的清亮上清,适于最佳形态的保持。

        (2) 蒸馏水用于达到最高的分部纯度。

        (3) 匀浆介质或酶分析混合液(cocktail) 用于保持酶的活性。

        9. 以 5000 g 离心 15~20 分钟收集高尔基体。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序