细胞和孢子的长期保存

一、冻存细胞

1. 用新鲜的 HL5 培养基收获细胞，使其密度为 2X10⁶ 到 4X10⁶，将等分为 1 ml 的细胞悬液加入到 1.5 ml 的 Eppendorf 管或冻存管中，置于冰上。

2. 加入 111 μl DMSO，混匀，置于冰上。

3. 立即将管放入 -20℃ 冰箱冻存 2 小时。

4. 将管转移至 -70℃ 冰箱。

5. 储存一周后融化一份，以证明本方法工作良好且盘基网柄菌可以被复苏。

二、融化细胞

1. 向一个 60 mm 的培养皿中加入 3 ml HL5 培养基。

2. 用一个 1 ml 的吸管，在培养皿中吸取 0.5 ml 培养基并加到冻存的管中，上下吹打以融化细胞悬液并迅速转移到培养皿中。

3. 第二天换培养基，细胞将在几天内开始生长。

三、冻存孢子

1. 在细菌平板或饥饿平板上培养细胞，使果实体成熟 1~2 天直到它们变黄。

2. 用一个灭菌的接种环轻触果实体的顶部，以收集 10 个孢子头，转移到一个盛有 1 ml 灭菌储存缓冲液的 Eppendorf 管中。

3. 充分混匀孢子悬液，每等份 0.1 ml 分装到  Eppendorf 管中。

4. 在干冰/乙醇浴中冷冻。

5. 储存于 -70℃ 冰箱。

6. 向冻存的一份孢子中加入 1 ml 饥饿缓冲液融化孢子，作系列稀释后在细菌平板上涂液。