附着ES细胞分化培养

1. 准备下列试剂和材料：

培养悬液中的单一胚胎样体

6 孔组织培养板

带棉塞巴斯德吸管

明胶包被的玻璃盖玻片

无菌镊子

ES 分化培养基

2. 准备明胶包被的玻璃盖玻片

3. 用无菌镊子在 6 孔组织培养板的每孔中放一块明胶包被的玻璃盖玻片。

4. 在生物安全柜中取下培养板的盖，紫外线下照射 3~5 分钟，杀死可能污染的细菌。

5. 用带棉塞巴斯德吸管把含有一个单一胚胎样体的一小滴 ES 细胞悬液转移到盖玻片中心。

6. 孵育 4~5 小时，使单一胚胎样体附着于明胶表面。保持培养物湿润。

7. 吸附后，每孔中缓慢加入 2 ml 分化培养基（预热至 37℃）。注意不要冲掉细胞。

8. 培养基变黄后换液，至少每周一次，加 2 ml 分化培养基。

9. 7 天内可观察到心肌细胞的自动收缩。