• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        MEF滋养板的制备

        相关实验:小鼠胚成纤维细胞的培养和体外分化

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 准备下列材料

        MEF 生长培养基

        胰酶溶液

        无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

        丝裂霉素 C

        明胶溶液(0.1%)

        150 mm 组织培养皿

        滋养细胞组织培养皿

        2. 准备一支 15 ml 离心管,加 5 ml 预热(37℃)MEF 生长培养基。取一支液氮冻存的 MEF 细胞,37℃ 水浴中轻轻振荡,细胞融化后转移到离心管中。

        3. 离心收集细胞,悬于 10 ml MEF 生长培养基,接种 150 mm 组织培养皿,加 MEF 生长培养基至 25 ml。37℃ 孵育至细胞长满(约 2~3 天)。

        4. 细胞长满后加入丝裂霉素 C。吸掉培养基,加入新配制的含丝裂霉素 C(10 μg/ml)的 MEF 生长培养基。37℃ 孵育 2.5 小时。

        5. 孵育同时准备明胶处理的滋养细胞培养皿。

        (1) 0.1% 明胶溶液覆盖空的组织培养皿底,室温保温 15 分钟。

        (2) 倒掉明胶溶液,培养皿晾干,平放待用。

        6. 去掉培养基,10 ml PBS 冲洗三次,完全去除丝裂霉素 C,加 10 ml 胰酶溶液,37℃ 孵育 5 分钟。

        7. 加 3 ml MEF 生长培养基,吹吸分散细胞,转移至 15 ml 离心管。

        8. 离心收集细胞,悬于 10 ml MEF 生长培养基,计数细胞。

        9. 丝裂霉素处理的 MEF 细胞以合适密度接种明胶包被培养皿。

        MEF滋养板的制备

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序