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        用流式细胞术检测血小板相关抗体

        相关实验:用流式细胞术检测血小板相关抗体

        最新修订时间:

        原理

        一种能够通过胎盘存在于血小板表面的免疫球蛋白,被称为血小板相关抗体(PA-IgG)。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        一、试剂

        洗涤缓冲液(PBS/EDTA/BSA),PBS 缓冲液,含 10 mmol/L EDTA 和 0.5% BSA。

        抗体:羊 F(ab+2 抗-人 IgG(Fc Sp)-R-PE(H10104,Caltag 为多克隆抗体)。

        阴性对照:羊 F(ab+2 2 IgG-PE(11304,Caltag)。

        二、样本

        正常人血样 1 份,血小板数值在正常范围,具体数目不详。

        患者血样 2 份,为 1 个月龄的双胞胎患者 1 和患者 2,均为贫血血小板,具体数目不详。

        三、步骤

        1. 用含 EDTA 抗凝剂的血液收集管采血,3 个血样均取 2 ml,分别加到 3 支流式标准管中。

        2. 离心 500 r/min,将上清(富血小板血浆)转到另外 3 支流式标准管中。

        3. 离心 2500 r/min 3 min。吸去血浆,用与血浆等体积的洗涤缓冲液重悬血小板。如果必要,可用旋涡混合器混匀。

        4. 用洗涤缓冲液洗涤血小板 3 次,每次离心 2500 r/min 3 min。

        5. 适量洗涤缓冲液重悬血小板,用血球计数仪测定血小板的浓度,其中正常血样血小板计数为 2000 /ul,患者 1 的血小板数为 6000 /ul,患者 2 的血小板数为 7000 /ul(稀释浓度)。

        6. 每个含重悬血小板的流式标准管分为两管。A 管为检测管,B 管为阴性对照管,共 6 只管。正常人血样分别取 250 ul 于 2 支 流式标准管(A 管和 B 管)中,每管血小板总数为 5x106。分别取 80 ul 患者 1 的血样于 2 支流式标准管(A 管和 B 管)中,每管血小板总数为 4.8x106。分别取 70 ul 患者 2 的血样于 2 支流式标准管(A 管和 B 管)中,每管血小板总数为 4.9x106

        7. 将上述 6 支流式标准管,于 A 管均加 5 ul 羊 F(ab+2 抗-人 IgG(Fc Sp),B 管均加 5 ul 羊 F(ab+2 IgG。

        8. 室温,避光孵育 15 min。用洗涤缓冲液再洗 1 次,方法同步骤 4。

        9. 去上清,加 0.5 ml 洗涤缓冲液重悬,上机分析。

        用流式细胞术检测血小板相关抗体

        来源:丁香实验

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