• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        石蜡包埋组织样本的制备

        相关实验:石蜡包埋组织样本的制备

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 把石蜡包埋组织切成 40~50 μm 厚的组织片 3~5 片,或用乳钵研成 0.5 mm 直径大小颗粒状,放入 10 ml 的试管中。

        2. 加入二甲苯 5~8 ml 时,在室温下脱蜡 1~2 d,视石蜡脱净与否,更换 1~2 次二甲苯,石蜡脱净后,弃去二甲苯。

        3. 水化:依次加入 100%、95%、70%、50% 梯度乙醇 5 ml,每步为 10 min,去乙醇,加入蒸馏水 3~5 ml,10 min 后弃之。

        4. 消化:加入 2 ml 0.5% 胰蛋白酶 ( pH 1.5~2.0) 消化液,置 37℃ 恒温水浴中消化 30 min,在消化期间,每隔 10 min 用振荡器振荡 1 次。

        5. 消化 30 min 后,立即加生理盐水终止消化。

        6. 经 300 目尼龙网过滤,未消化好的组织可做第 2 次消化。

        7. 收集细胞悬液,离心沉淀 1500 r/min,再以生理盐水漂洗 1~2 次,离心沉淀 500~800 r/min,去碎片。

        8. 保存细胞备用。

        注意事项

        1. 一定要将石蜡从组织中脱干净,一般脱蜡第 1 遍应在 12 h 左右,第 2 遍为 30 min 左右。检测是否将石蜡已脱净的方法是弃去二甲苯,加入无水乙醇,如果无絮状物浮起,即可视为蜡己脱净;反之,则蜡尚未脱净。

        2. 消化时间不可过长,以免造成已释放出的细胞核被消化。

        3. 切片不可过薄或过厚,过薄细胞碎片过多,影响分析结果;过厚造成脱蜡不理想。

        4. 消化后的组织应先用眼科剪刀剪碎,然后再加胃蛋白酶消化,30 min,37℃,然后用尖吸管吹打成悬液状。

        5. 消化后的组织悬液经过过滤后可能细胞数很少,这样就要将组织片放在 300 目尼龙网上,用底部圆滑的试管磨碎,再用 PBS 液冲洗一下;如此反复,就能得到较多的单细胞悬液。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序