聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测

丙烯酰胺凝胶电泳分离的放射性 DNA 条带可用放射自显影的方法检测。含有放射性 DNA 的聚丙烯酰胺分析凝胶，在放射自显影前通常要固定和干燥。然而，若要从凝胶中回收放射性 DNA 条带，则不应固定和干燥。

一、材料

1. 缓冲液和溶液

乙酸

2. 凝胶

聚丙烯酰胺凝胶

3. 专用设备

市售凝胶干燥机（可选或不选）

塑料筛（筛目大小为 1 cm，园艺和五金商店有售）（可选或不选)

放射性墨水或化学发光标准参照物

Whatman 3 MM 滤纸

二、方法

1. 将凝胶及其附着的玻璃板于 7% 乙酸中浸 5 min。小心地从固定液中拿起玻璃板以取出凝胶。

2. 去离子水短暂漂洗凝胶，用一叠 Kimwipes 纸蘸去凝胶表面多余的液体。

3. (可做或不做）将凝胶放在 Whatman 3 MM 纸上，用市售凝胶干燥机干燥。

4. 将凝胶及支撑的玻璃板包在 Saran Wrap 膜中，用梳子宽的一端或折叠的 Kimwipe 纸除去 Saran Wrap 膜中的气泡或皱褶。

5. 将放射性墨水或化学发光标准参照物标记的黏性小标签贴于 Saran Wmp 膜表面，以便对准凝胶与胶片的位置。用透明胶带覆盖放射性墨水标签，以免污染胶片盒和增感屏。

6. 将凝胶倒置，按以下步骤对 X 射线片（如 Kodak XAR-5 或同类产品）曝光：

(1) 在暗室里，用胶带将密封的凝胶与裁成玻璃板大小的一张 X 射线片粘在一起。

(2) 用不透光的铝箔将凝胶与胶片包好。

(3) 于室温或 -70℃ 曝光合适的时间，增感屏使用与否均可。

(4) 按制造商的建议显影、定影和干燥 X 射线胶片。