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        酵母人工染色体的应用

        相关实验:酵母人工染色体的应用

        最新修订时间:

        原理

        直到 20 世纪 80 年代中期,尚无技术可用于基因组 DNA 黏性大片段的分离、扩增和分析。在此之前,如果要对某一 DNA 片段进行详细的物理和功能研究,该 DNA 的长度应能够装入 λ 噬菌体颗粒或黏粒载体。

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        1. 缓冲液和溶液

        用 YPD 培养基配制的 30% (V/V) 的甘油

        2. 凝胶

        脉冲场凝胶电泳仪

        3. 培养基

        选择性培养基

        YPD 琼脂平板

        YPD 培养基

        4. 专用设备

        试管(2 ml )

        5. 载体和酵母菌株

        携带重组 YAC 克隆的酿酒酵母

        二、方法

        1. 实验室获得克隆后,立即划线接种于选择培养基中,30℃ 培养 48 h 以获得单个菌落。

        2. 挑取 6~12 个单菌落,分别加入 10 ml YPD 培养基中。将培养物在 30℃ 剧烈振荡 ( 300 r/min ) 培养过夜。在此期间,细菌数应达到饱和(OD600=2.0~3.0,约为 3 X 107 个细胞/ml)。

        3. 分别从每一培养物中取 9 ml,提取酵母 DNA。

        4. 用 PFGE 分析每一个 DNA 产物中 YAC 的大小。

        5. 用 Southern 杂交或 PCR 确定 YAC DNA 中存在靶序列。

        6. 如果结果满意,即培养液中含有的 YAC 大小相同,没有不稳定或重排的迹象,并且靶序列也存在,则可以选择 1~2 个培养物长期保存。

        酵母人工染色体的应用

        来源:丁香实验

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