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        λ噬菌体噬菌斑的挑取实验

        相关实验:λ 噬菌体噬菌斑的挑取实验

        最新修订时间:

        原理

        遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物,也可用于以后的分析。

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        1. 缓冲液和溶液

        氯仿

        SM

        2. 专用设备

        硼硅酸盐巴斯德设管(配有橡皮球)或微量移液器

        微量离心管或聚丙烯离心管(13 mm X 100 mm)

        3. 载体和菌株

        λ 噬菌体,在菌苔上形成完全独立的噬菌斑。

        二、方法

        1. 在微量离心管或聚丙烯离心管中加入 1 ml SM,再滴入一滴(约 50 μl)氯仿。

        用聚丙烯离心管是因为它们抗氯仿。

        2. 用一个带有橡皮球的硼硅酸盐巴斯德吸管或微量移液器,刺穿所选择的 λ 噬菌体噬菌斑直到下层的硬琼脂,轻轻一吸,将噬菌斑和下层琼脂一起吸入吸管中。

        另外,也可用灭苗的 8 cm 长的木质签(又称挑苗签或棉签)或牙签轻轻接触所要挑选的噬菌斑中央的顶层琼脂/琼脂糖的表面来挑取噬苗斑,立即将签放入 SM/氯仿中,涡旋振荡使含噬菌体的琼脂/琼脂糖脱落。

        3. 从硼硅酸盐巴斯德吸管中洗下琼脂块,置于含 SM/氯仿(在步骤 1 中制备)的试管中,将试管盖上帽于室温放置 1~2 h,使噬菌体颗粒从琼脂块中脱落下来。为帮助洗脱,可将试管放于摇床上轻轻转动。最后,将噬菌体悬浮液置 4℃ 保存。

        λ噬菌体噬菌斑的挑取实验

        来源:丁香实验

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