含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶的制备实验

材料

本方法包括方案 8 中所有物品，加上：
甲酰胺（100%)

方法

1. 依方案 8 步骤 1~8 淸洗并安装玻璃板制成胶模。

2. 在实验桌的工作区上铺上衬塑料的保护纸。
灌制测序凝胶时几乎不可避免将丙烯酰胺溶液滴于桌面，可准备一个大托盘对其进行收集。

3. 在一个 250 ml 有臂锥形瓶中配制适当浓度的丙烯酰胺溶液（表 12-20)。这些溶液足够配制一块 40 cmx40 cm 的测序凝胶。
重要：凝胶的配制必须一气呵成，中碱间不能断断续续。

4. 混合所有试剂，在 55°C 水浴中加热 3 min 帮助尿素溶解。
溶解尿素的过程十分缓慢，必须依靠外部加热。

5. 从水浴中取出溶液，冷却 15 min 至室温。不断搅拌混合物。加水到 100 ml。

6. 把烧瓶放在真空装置里抽去气体。
防止聚合时产生气泡，该过程会产生热量。

7. 把溶液放入 150 ml 玻璃烧杯中。加 3.3 ml 新制的 1.6% 的过硫酸铵，轻轻搅动溶液使试剂混匀。



8. 加 50ul TEMED，旋动容器以混匀溶液。直接配胶或者用 60 ml 注射器吸取 40 ml 上述溶液。注意，不要有气泡。

9. 依方案 8 中步骤 16~22。
重要：由于甲酰胺减慢了聚合速度, 聚合常需要 2~3 小时。