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        高 GC 含量片段的 PCR 扩增实验

        相关实验:高 GC 含量片段的 PCR 扩增实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一、材料

        1. 试剂

        甜菜碱(Sigma 公司)

        dNTP 溶液(含四种 dNTP, 每种 25 mmol/L)

        二甲基亚砜(DMSO)(Sigma 公司)

        四甲基砜(Sigma 公司)

        2. 酶和酶缓冲液

        Taq 酶

        Taq 酶缓冲液(Taq 酶制造商提供)

        3. 核酸和寡核苷酸

        人类基因组 DNA,每个反应中 20ng,

        hRF3(hGSPTl) 引物:hRF3f   CCGC/CTCT/GTCG/TCGT/CGC

                                           hRF3r   CCGC/GCTG/AGGT/TCTC/CC

        Klotho 外显子 la 引物:klolaf   CTCG/CAGG/TAAT/TATT/GCCAG

                                             klolar   GATG/GACG/CACC/CTTG

        Klotho 外显子 lc 引物:klolcf   GTGC/AGCC/CGTG/GTCAC

                                           klolcr   GACT/CAGT/TCCC/ACAC/TTC

        4. 设备

        PCR 仪

        5. 其他

        琼脂糖凝肢电泳所需设备和试剂

        二、方法

        1. 在灭菌的 0.2 ml 的 PCR 管中加入下列试剂。

        基因组 DNA                                20ng

        引物(每种)                             15pmol

        Taq 酶                                         0.5U

        10 x buffer                                  2.5ul

        dNTP 溶液(含四种 dNTP)         250umol/L

        加 H20 到                                    25ul

        根据处理条件的不同,分别包含 DMSO(5%)、甜菜碱(lmol/L)、甜菜碱(2mol/L)、甜菜碱(lmol/L) 和 DMS0(5%)、甜菜碱(2mol/L) 和 DMS0(5%)、四甲基砜(0.4mol/L),对照不加任何其他试剂。

        2. 采用下列程序 A 或 B 运行 30 个循环。

        高 GC 含量片段的 PCR 扩增实验

        来源:丁香实验

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