方案11.8 用10× 浓缩液配制培养基（用于开式容器于二氧化碳温箱中培养）

配制全成分培养基时，准备好几个盛有无菌去离子蒸馏水的容器，一个容器的容量至少要够用1~3 周。加浓缩培养基和其他成分，调整pH , 直接使用或放回冰箱。

用于开式容器于 CO₂ 温箱中培养，或在密闭的瓶中充了 CO₂ 气体，CO₂ 浓度为 5 % ，高 HCO₃^- 浓度。

1. 将血清和谷氨酰胺解冻，置于超净工作台内。

2. 所有曾放入水浴锅的瓶子都要擦干净后再放人超净台。

3. 加入上述“无菌溶液”所列成分。

4 . 加人 1 mol/L NaOH ，使 pH 达到 7.2 (20°C ) , 孵育之后培养基的 pH 将上升至 7.4 (37°C ) 但如果是第 1 次使用的配方，这个数值可能还需要通过滴定试验来检验。

(a) 在 5 个培养皿中分别加入 5 ml 培养基。

(b) 每个培养皿中分别加人 5~50 μl 不同量的 1 mol/L NaOH 。

(c) 置于 5% CO₂ 温箱中孵育至少 2 h ，最好过夜。

如果需要加人其他成分，而这些成分是用水配制的，，则加入前应先从已准备好的水中取出相同体积的水；如果这些成分溶解在等渗盐溶液中，则只要加入至终体积。因为血清是等渗的，所以血清也是加人至终体积，尽管这样做会稀释培养基的营养成分。

在37°C 时要不断地平衡和检测pH , 随着温度的升高，CO₂ 的溶解度会降低，HEPES 的 pKa 也会发生变化。