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        二乙酰-肟法测定血清尿素氮实验

        相关实验:二乙酰-肟法测定血清尿素氮实验

        最新修订时间:

        原理

        在酸性反应环境中加热,尿素与二乙酰缩合,生成色素原二  嗪,称为Feorin反应,因为二乙酰不稳定,故通常由反应系统中二乙酰-肟与强酸作用,产生二乙酰,二乙酰与尿素反应,综合生成红色的二嗪,其颜色的深浅与血清中尿素含量成正比。

        材料与仪器

        步骤

        一、 实验试剂:

        l. 碱性试剂:在三角烧瓶中加蒸馏水约100ml,然后加入浓硫酸44ml及85%H3PO466ml冷至室温,加入硫氨脲50mg及硫酸镉2g溶解后加蒸馏水稀释至1升,置棕色瓶放冰箱保存,可稳定半年。

        2. 二乙酰-肟溶液:称取二乙酰-肟20g,加蒸馏水约900ml溶解后,再用蒸馏水稀释至1升置棕色瓶中,贮存放于冰箱内可保存半年不变。

        3. 尿素标准贮存液(100mmol/L):称取干燥纯尿素(MW=60.06)0.6g,溶解于水中并稀释至100毫升,加0.1g叠氮钠防腐,置冰箱内稳定六个月。

        4. 尿素标准应用液(5mmol/L):取5.0ml贮存液用去氨蒸馏水稀释至100ml。

        二、实验操作:
        二乙酰-肟法测定血清尿素氮实验
        三、计算:

        血清尿素氮 mmol/L=(测定管吸光度/标准管吸光度)×5

        血清尿素氮 mmol/L= 尿素mmol/L×28

        参考值:2.86--8.2 mmol/L尿素

        注意事项

        l. 如果血清或血浆尿素氮超过400mmol/L时,则必须将标本用生理盐水稀释后再测定,结果乘以稀释倍数报告之。

        2. 微量吸管需要校正,吸管保持清洁干燥,加入样本后显色剂沿试管壁加入。

        3. 试剂中加入硫氨脲和硫酸镉,增进显色强度和色泽稳定性,但仍有轻度褪色现象(每小时<5%),加热显色冷却后,应及时比色。

        4. 尿液中尿素也可用此法进行测定,由于尿液中尿素含量高,标本应用蒸馏水作l:50倍稀释,如果显色后吸光度仍超过本法的线性范围,还需将稀释尿液再重稀释,重新测定。

        来源:丁香实验

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