血清门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定实验

AST 催化门冬氨酸与α-酮戊二酸的氨基转换反应，生成草酰乙酸和谷氨酸。

L-门冬氨酸十α酮戊二酸 ＝ 草酸乙酸十L-谷氨酸

经 60min反应后，加入2,4 二硝基苯肼终止反应，并与反应液中的二种α-酮酸生成相应的2,4二硝基苯腙，在碱性条件下，两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500－520nm处差异最大，草酸乙酸所生成的苯腙的显色强度显著大于α-酮戊二酸本腙，据此可用比色法测定AST活力。

一、 实验试剂：

l. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液，PH7.4

2. 1mmol／L 2，4二硝基苯肼溶液

3. 0.4mol/L氢氧化钠溶液

4. 2mmol/L 丙酮酸标准液

5. AST底物溶液（DL-门冬氨酸200mmol/L. α-酮戊二酸2mmol/L）：称取α-酮戊二酸29.2mg和DL-门冬氨酸2.66g，置于一小烧杯中，加人lmol/L氢氧化钠溶液1.5ml，溶解后加0.lmol/L磷酸盐缓冲液80ml，用lmol/L氢氧化钠调至PH7.4，然后将溶液移人100ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲浪稀释至刻度放置冰箱保存。

二、 实验操作：


各管混匀后，置37℃水浴箱保温20min，然后每管加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml，室温放置5min，用分光光度计在波长505nm处以蒸馏水调零点，读取各管吸光度，测定管吸光度减去样本对照管吸光度，从标准曲线套得AST活动单位。

标准曲线绘制：

参考值：8-28卡门单位。

l. 本法的缺点是标本AST活性高时草酰乙酸对AST现实反锁抑制，使测定结果偏低，酮血症中乙酰乙酸及β-羟基丁酸，因没对照管不会引起测定结果假性偏高。

2. 若用L-门冬氨酸称量为1.33g。

3. 等血清酶活力超过15O卡门单位时，应将血清用生理盐水稀释5倍或10倍后再进行测定。

4. 底物中的α-酮戊二酸和2,4-二硝基苯肼为显色物质，称量必须准确，每批试剂的空白管吸光度上下波动范围不应超过0.015A，如超出范围应检查试剂和仪器方面问题。