• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定实验

        相关实验:植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定实验

        最新修订时间:

        原理

        植物材料经Tris-HCl缓冲液研磨、离心后,可溶性蛋白质溶于上清液中,非可溶性蛋白则存在于沉淀部分。将沉淀用碱水解,则会得到非可溶性蛋白的提取液。蛋白质提取液与考马斯亮蓝G-250反应呈蓝色。在一定范围内,蛋白质的含量与反应液在595nm波长的吸光度呈正比,由此可求出蛋白质的含量。

        材料与仪器

        步骤

        1. 牛血清蛋白标准曲线的制作

        (1)取6支试管,编号,按下表配制每管含量为0~100μg的牛血清蛋白标准液。

        加入表中试剂后,摇匀,以0号管为空白对照,在595nm波长处测定其吸光度(A)值。
        植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定实验

        (2)标准曲线绘制

        以牛血清蛋白含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。

        2. 蛋白质的提取

        称取叶片0.3~0.5g,剪碎于冷冻过的研钵中加提取液3 ml,加少量石英砂,在冰浴中快速研磨成匀浆,匀浆倒入离心管中,再用5 ml提取液(分两次)将研钵中匀浆洗入离心管,然后在10000 r/ min,4℃条件下离心20min,上清液即为可溶性蛋白质提取液。

        将离心所得的沉淀加3 ml 1mol·L-1NaOH溶液,在90℃恒温水浴中加热20min后,在4000 r / min,4℃条件下离心10min,上清液即为非可溶性蛋白质提取液。

        3. 测定

        上述两种上清液各取0.1 ml分别放入2支试管中,每管再加Tris缓冲液0.9 ml,空白对照管加Tris缓冲液1 ml,然后各管分别再加入考马斯亮蓝染色液5 ml,摇匀,在595nm波长处测定吸光度(A)值。

        五、结果计算

        根据所测得的样品液吸光度值,从标准曲线查出蛋白质含量,按下公式计算可溶性蛋白质和非可溶性蛋白质含量。

        植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定实验
        植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定实验

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序