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        过氧化氢酶的活性测定实验

        相关实验:过氧化氢酶的活性测定实验

        最新修订时间:

        原理

        H2O2在240 nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

        材料与仪器

        步骤

        一、仪器与用具

        紫外分光光度计;离心机;研钵;250ml容量瓶1个;0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支;10ml试管3支;恒温水浴;

        二、试剂

        0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液(内含1%聚乙烯吡咯烷酮);

        0.1mol/L H2O2(用0.1mol/L高锰酸钾标定)。

        三、方法

        1. 酶液提取:称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中,加入2~3ml 4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后,转入25ml容量瓶中,并用缓冲液冲洗研钵数次,合并冲洗液,并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min,取上部澄清液在4000rpm下离心15min,上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。

        2. 测定:取10ml试管3支,其中2支为样品测定管,1支为空白管,按表40-2顺序加入试剂。

        紫外吸收法测定H2O2样品液配置表

        过氧化氢酶的活性测定实验

        25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2,每加完一管立即记时,并迅速倒入石英比色杯中,240nm下测定吸光度,每隔1min读数1次,共测4min,待3支管全部测定完后,按下式计算酶活性。

        3.结果计算:

        以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位(u)

         过氧化氢酶的活性测定实验 

        注意事项

        凡在240nm下有强吸收的物质对本实验有干扰

        来源:丁香实验

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