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        人末梢血微量全血培养染色体显示法

        相关实验:培养细胞染色体显示法实验

        最新修订时间:

        原理

        显示人染色体过去主要取骨髓培养,利用其中干细胞能进行增殖显示染色体。末梢血淋巴细胞是已发生分化、处于功能态(G0 期)和无分裂活动的细胞。

        但在PHA的诱导下,
        T淋巴细胞可重新进入增殖态发生细胞分裂。

        为获得淋巴细胞可用多量血分离(10 ml)和
        微量全血培养两种方法。

        多量血法较繁锁已少用,用微量全血培养法效果与多量血相同。
        每次从被检者静脉或指尖、耳垂等处仅采少量血(0.5 ml~2 ml),即可够做数个样品的培养,从而极大简化了观察人染色体的方法。

        材料与仪器

        步骤

        1.  培养液准备

        取15 ml培养瓶数个,每瓶内分别充入5 ml培养液(pH 7.2),内


        1640 培养液(含10 %~15 %小牛血清)

        PHA 0.1 ml
         
        青霉素100 单位和链霉素100 μg/ml 培养液

        2.  抽血针管准备

        取2~5 ml 针管一支,在消毒后的无菌操作台或无菌操作箱中
        安装好注射器,无菌抽肝素(100 U/ml BBS)少许湿润针管,如动作迅速不用肝素亦可;

        3.  采血

        用棉签沾75 %酒精给患者或献血者的皮肤消毒两次(勿用碘酒!),缚止血
        带,静脉取血1~2 ml,无菌操作迅速向每一瓶培养中加血0.4~0.5 ml;如系外出采血,安装针管及分装血液两步骤亦可在无菌条件略差的环境内操作,但动作要迅速,以减少污染;在采血量不多或不应抽血的情况下,亦可在耳垂、手指肚(无名指)用刺血针采血;

        4.  培养和加秋水仙素

        37 ℃温箱中培养到第60~72 小时之间,此时细胞分裂相最
        多,向每培养瓶内加秋水仙素,最终浓度0.02~0.08 μg/ml营养液,再培养4~6 小时;

        5.  低渗

        1000 转/分钟,离心10 分钟后,吸除上清液,加入预温过的0.075 M KCl
        溶液10 ml,置温箱中低渗处理15~20 分钟;

        6.  其余步骤与处理传代细胞法相同。

        人末梢血微量全血培养染色体显示法

        来源:丁香实验

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