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        细胞浸润生长性检测实验

        相关实验:细胞浸润生长性检测实验

        最新修订时间:

        原理

        浸润性生长是细胞浸入或穿透其它组织增殖生长能力,浸润生长性检测是检测癌性细胞的一项有意义的指标。检测方法需用其它正常组织和癌细胞共同培养,观察癌细胞向正常组织浸润生长的情况。

        材料与仪器

        步骤

        常用鸡胚皮肤或心肌组织块,作为被浸润生长的对象;今以鸡胚皮肤为例,培养过程如下

        1.  程序

        (1)鸡胚浸出液制备
         
        (2)琼脂层制备
         
        1 %Bacto琼脂(用不含NaHCO3的Eagle缓冲液配)10 分
         
        小牛血清 4 分
         
        鸡胚浸出液 4 分

        (3)鸡胚皮培养

        无菌从10 天胚龄鸡胚背部取皮,切成6~8mm3小块;每皿中置2~3 块,贴在琼脂层表面;

        (4)取内径6 mm,厚2 mm的无菌小磁杯或玻璃圈(硅橡胶圈亦可),套在鸡皮小块上;

        (5)共培养

        向每个小磁圈中加入25~30 ul 细胞悬液(含104个细胞的2 倍培养液),盖上平皿盖,置37 ℃CO2温箱中培养;

        (6)补液

        次日再向每个环中补加2 倍培养液2.5 ul;

        (7)切片观察

        第4 天挖取出鸡皮块,10%福尔马林固定,常规包埋、切片、染色、光学显微镜下观察细胞对鸡胚皮肤浸润的情况。

        2.  结果

        如癌性细胞已浸入鸡胚皮肤内,说明该细胞具有浸润生长能力。

        注意事项

        实验过程应避免细菌感染,如癌性细胞已浸入鸡胚皮肤内,说明该细胞具有浸润生长能力。

        常见问题

        鸡胚浸出液内含有生长因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等,有刺激细胞生长作用,为早年培养使用的培养用液,现已被合成培养液所代替,但在某些研究中仍有一定应用价值。

        来源《组织培养和分子细胞学技术》

        来源:丁香实验

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