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        组织块培养法

        相关实验:初代细胞培养实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  剪切

        把组织小块(1cm3)置入小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污,吸净Hanks液,用眼科剪反复剪切成1mm3块为止;
        2.  摆布

        用弯头吸管吸取若干小块,置入培养瓶中;用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底上,小块相互距离以0.5 cm 为宜,每一25 ml培养瓶底可摆布20~30 块;

        3.  轻轻翻转培养瓶,令瓶底向上;注意翻瓶时勿令组织小块流动,塞好瓶塞,置36.5 ℃温箱2 小时左右(勿超过4 小时),使小块微干涸;

        4.  培养

        从温臬中取出培养瓶,开塞,46 度斜持培养瓶(瓶底仍向上),向瓶底角部轻轻注入培养液小许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶底上的组织小块(组织小块附着尚不牢,注意不要把组织块冲走);置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后,再补加培养液。

        组织块培养法

        常见问题

        一、评价

        翻转培养瓶的目的是为使组织块微干涸,以利附和免从瓶壁流失,但时间不宜过长,超过三四小时以上可能对组织有不利影响。

        组织块培养法操作简便,顺利情况下,组织小块贴壁培养后24 小时,细胞即可从小块边缘向四周游出,通过生长增殖,最终亦可连接成片;原组织小块可完全散成细胞而消失。如组织块过大,残留小块换液时弃掉或再置另瓶中继续培养。

        组织块通过反复剪切可能受一定损伤,并非每块组织都有生长能力,但只要有一部分能生长往往即可形成单层。

        来源:丁香实验

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