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        夹心法ELISA

        相关实验:白细胞介素 8(IL- 8)检测实验

        最新修订时间:

        原理

        采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  包被

        pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96
        孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小时。
          
        2.  封闭

        0.1 %吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3 %BSA Buffer A(Buffer B)
        200 μl/孔,放37 ℃,1 小时。

        3.  加待检样品

        Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/
        孔,放37 ℃,3 小时。

        4.  加酶标抗体

        Buffer A冲洗96孔板五次,3 %PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加
        入96孔板,100 μl/孔,放37 ℃,1 小时。
          
        5.  显色

        Buffer A冲洗96孔板五次,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)),0.2 mg/
        ml,加3 %H2O2,2 μl/ml,加入96孔板,100 μ/孔,室温下或37 ℃显色。
         

        注意事项

        1.  待检标本如为血清,应采用一次性容器,血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
          
        2.  封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。

        来源:丁香实验

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