成纤维细胞微丝的染色

一、方法
 

1.  在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片，在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养，用作对照。

2.  在有两片的平皿内加100 μg/ml 的细胞松弛素B 4滴继续培养半小时。

3.  将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做染色处理，另一张用培养液洗五次（在平皿内换五次培养液，每次都要摇动），继续培养、观察。两小时后细胞形状恢复，接近正常。

4.  对恢复的盖片与第一张没用药的盖片一同做染色处理。

5.  染色处理

（1）将需染色的盖片放入盛有PBS的平皿内用吸管轻轻吹洗盖片，换液三次，每次3分钟，洗去培养液。

（2）将盖片移入2%Triton  X-100液，置37℃恒温箱内处理20~30分钟，以提取骨架以外的蛋白质，使骨架图像清晰。

（3）立刻将盖片移入M-缓冲液，换洗三次，每次3分钟。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。

（4）将盖片移入3%戊二醛固定15分钟。

（5）将盖片移入0.2%考马斯亮兰染液中，染色15分钟。然后小心地用自来水冲洗，空气干燥。

二、结果
 

1.  光镜观察，微丝聚集成的张力纤维束被染成蓝色。

2.  在没用药的标本上，成纤维细胞多数有突起，微丝沿突起规则排列。

3.  用细胞松驰素B处理的标本，由于微丝被破坏突起缩回，多数细胞形状变圆。

4.  用药处理后又洗去药的标本，由于解除了药的作用，肌动蛋白重新聚台形成微丝，细胞形状恢复正常。