基本方案

从单层培养中制备：

 

1a.  以毎瓶1.8×10⁷ Sf9细胞的密度，将细胞接种于两个150 cm² 培养瓶，在含10%胎牛血清的完全培养液中培养。于27℃让细胞贴壁3 h，然后移去完全培养液。以感染复数为0.1的病毒量，加入5 ml 含野生型或重组病毒的无血清完全培养液。于27℃温育1 h。

 

2a.  去掉病毒接种物，代之以20 ml 10%胎牛血清的完全培养液，于27℃温育1 h。每天在光学显微镜下检查细胞有无包涵体出现或细胞病变效应。

 

3a.  当大多数细胞含有包涵体或显示出细胞病变效应时（通常在感染后4至5天），收获病毒。将感染的培养物移入灭菌试管中，于4℃以1 000 g 离心10 min，将上清移至一新的灭菌试管，分别吸取1 ml 的小份上清移至几个螺口冻存管中，置液氮罐长期保存，将剩余的病毒毒种保存于4℃暗处。

 

从悬浮培养肀制备：

 

1b.  用50 ml 含10%胎牛血清的完全培养液在100 ml 旋转培养瓶中培养Sf9细胞，不停地振荡直到长至约2×10⁶细胞/ml。于室温以1 000 g 离心10 min 回收细胞，弃去上清。以感染复数为0.1的病毒量，加入含野生型病毒或重组病毒的10~20 ml 无血清完全培养液重悬细胞团块。于室温培养1 h。

 

2b.  用含10%胎牛血清的完全培养液将体积加至100 ml 将细胞置于100 ml 旋转培养瓶中，于27℃培养3~4天，不停地振荡。

 

3b.  当大多数细胞含有包涵体或显示出细胞病变效应时，收获感染细胞，如步骤3a所述加以处理。