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        基本方案

        相关实验:组织切片的免疫金标记

        最新修订时间:

        原理

        利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外,胶体金还可与其它多种生物大分子,如SPA、PHA、ConA等结合。

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。
         
        2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
         
        3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 μl 抗体,应能盖住切片)。
         
        4.  用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。

        5.  以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。
         
        6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每载玻片可加40~50 μl 抗体)。
         
        7.  加免疫金标记第二抗体温育2 h。
         
        8.  显微镜下观察结果或放密闭玻片盒中,室温贮放。

        9.  显微镜下观察结果,或置玻片盒中贮于4℃。

        来源:丁香实验

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