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        备选方案1(玻璃珠法)

        相关实验:酵母菌RNA制备实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1.  培养并收集酵母菌细胞,冷冻细胞沉淀。

        2.  用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。
         
        3.  加1体积冷的酸洗玻璃珠(体积与约200 μl 水相等)、300 μl 的用RNA缓冲液平衡的25:24 :1酚/氯仿/异戊醇,拧紧瓶盖,然后颠倒并上下振荡以保证珠子悬浮,在旋涡混合器上高速剧烈振荡2 min。

        4.  室温下离心1 min,将200~250 μl 水(上)相转移到一个干净的离心管中。

        5.  加等体积的25:24:1酚/氯仿/异戊醇,激烈振荡10 s。
         
        6.  重复步骤4,加3体积冰冷的无水乙醇,充分混合,于-20℃放置30 min 以上,或在干冰上放置5 min。

        7.  于4℃离心2 min,吸出或倒掉上清,用冰冷的70%乙醇洗涤沉淀。

        8.  于4℃离心1 min,吸出或倒掉上清,干燥沉淀。沉淀用50 μl 水重悬,用分光光度法测定A260及A280以确定浓度,于-70℃贮存RNA。

        来源:丁香实验

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