YAC文库筛选

1.  YAC中心实验室用于筛选文库的方法进展很快。

2.  将一块或多块微量滴定板微孔中的YAC克隆转印到尼龙膜上，用单拷贝探针进行杂交，就可以筛选YAC文库了。

3.  然而，由 于杂交实验的信噪比较低以及制备所有的转印尼龙膜所需的花费巨大，绝大多数实验室已采用PCR方法来筛选文库。

4.  这种方法首先是从克隆集中提取DNA，一般每个克隆集代表1~4块微量滴定板。

5.  然后将从克隆集中提取的DNA合并成一 个更大的超集，约含1 500~2 000个YAC克隆。

6.  用PCR方法筛选这些克隆集和超集，就可以从中找出包含至少一个扩增克隆的候选微量滴定板。

7.  最终的克隆确认可通过采用PCR产物作探针进行常规的菌落杂交，或将微量滴定板按列或行分组再进行PCR分析， 逐步缩小范围最终获得YAC阳性克隆。

8.  验证PCR分析方法的特异性、反应参数、和筛选 复杂的YAC克隆集和亚集一般要花费2~6周时间。