基本方案

相关实验：粘粒和质粒克隆的纯化实验

最新修订时间：2024-05-13

材料与仪器

实验材料	质粒
试剂、试剂盒	LB 抗生素
仪器、耗材	涂布棒硝酸纤维滤膜

步骤

1. 通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。

2. 用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。

3. 取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37℃培养过夜，在直径100 平板上长出25~250个菌落为宜。

4. 将菌落影印在硝酸纤维素滤膜上，变性、复性、烤膜和杂交化。

5. 对照次级平板的放射自显影结果，挑选独立的阳性克隆，培养扩增后分离质粒或粘粒的DNA。

来源：丁香实验