• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        制备DNA

        相关实验:哺乳动物中制备基因组 DNA 实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1.  切下组织并立即剪成小块,置于液氮中冻结。
         
        2.  将200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵和研杵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每100 mg 组织用1. 2 ml 消化缓冲液悬浮。
         
        3.  500 g 离心细胞5 min,弃上请。贴壁生长细胞先用胰酶消化。

        4.  细胞用1~10 ml 冰冷的PBS重悬,500 g 离心5 min,弃上清,重复1次。

        5.  用1体积 的消化缓冲液重悬细胞。
         
        6.  将样品在盖紧的管中于50℃摇荡下温育12~18 h。
         
        7.  用等体积的酚/氯仿/异戊酵抽提样品,1 700 g 离心10 min。

        8.  如果样品溶解得不好, 再加1体积不含蛋白酹K的消化缓沖液,并重复离心。

        9  如果在界面上有一层厚的白色物质,重复有机抽提,将上层(水溶液)转移至一个新管中。
         
        10.  加入1/2体积7.5 ml 乙酸铵和2体积100%乙醉,1 700 g 离心2 min。
         
        11.  用70%乙酵洗涤,晾干,沉淀用TE。

        12.  缓冲液重新溶解,使终浓度在约1 mg/ml 左右。

        注意事项

        1.  如果是用肝组织,要除去胆囊,因其含有高水平的各种消化酶。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序