• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        Ethidium bromide染色法

        相关实验:核酸纯度、浓度与分子量测定实验

        最新修订时间:

        原理

        利用一系列不同浓度的DNA标准溶液(0、2.5、5、10、20、30、40、50 ng/ml),或已知浓度的DNA marker,和未知浓度DNA样品一起进行琼脂糖凝胶电泳,以EB染色后,在凝胶图象分析仪上观察,比较标准浓度及未知浓度的亮度,来求取DNA 的含量;比较DNA样品与DNA marker条带位置,推知DNA 样品分子量。

        材料与仪器

        步骤

        1.  称取1.5 g 琼脂糖加入盛有100 ml 0.5xTBE电泳缓冲液三角瓶中,摇匀,在微波炉上加热至琼脂糖完全溶解。加入溴化乙锭(EB)至终浓度0.5 ug/ml,并摇匀。 

        2.  用胶带将制胶板两端封好,插入适当梳子,将溶解的琼脂糖倒入,室温冷却凝固。 

        3.  充分凝固后撕掉两端的胶布,垂直向上小心拔出梳子,以保证点样孔完好。凝胶置入电泳槽中,加0.5xTBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1~2 mm。

        4.  用移液器吸取DNA样品 8 ul 与 2 ul 的载样缓冲液混匀,小心加入点样孔,蓝色样品混合物将沉入点样孔下部。同时点10 ul DNA Marker作为分子量标准。 

        5.  打开电源开关,调节电压至3-5 V/cm,可见到条带由负极向正极移动,约半小时后即可观察。 

        6.  在凝胶图象分析仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子量标准比较被扩增产物的大小;同时比较标准浓度及未知浓度的亮度,求取DNA 的含量。

        注意事项

        1.  A260/A280>1.8表示DNA/RNA的纯度高。若数值<<1.8,表示纯度低,这时由OD260测得的DNA含量较不可信,核酸溶液中含有较多蛋白质,因此最好将前述所得核酸再重新抽取。
         
        2.  测定260 nm 吸光值,OD=1.0代表值如下:
         
        (1)ds DNA (double stranded DNA) = 50 mg/ml
         
        (2)ss DNA (single stranded DNA or simgle-stranded RNA) = 40 mg/ml
         
        (3)oligonucleotide = 33 mg/ml
         
        3.  EB是致癌物质,切勿用手接触,更不要污染环境。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序