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        萃取法

        相关实验:虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离

        最新修订时间:

        原理

        羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分,均可溶于乙醇中,故可用乙醇将它们取出来。羟基蒽醌类易溶于乙醚等弱极性溶剂,白藜芦醇苷在乙醚中溶解度很小,利用它们对乙醚的溶解性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离,再利用各羟基蒽醌类结构上的不同所表现酸性不同,用PH梯度萃取法分离它们。

        材料与仪器

        步骤

        一、提取


        乙醇总提取物的制备:取虎杖粗粉200g,于1000ml圆底烧瓶中回流,第一次加500ml乙醇回流一小时,第二次加300ml乙醇回流30分钟,第三次加250ml乙醇回流30分钟,合并三次乙醇提取液,放置,如有沉淀可过滤一次,滤液减压回收乙醇至干,得膏状物。


        二、分离


        1.亲脂性成分与亲水性成分的分离:


        将上述膏状物加水10ml,乙醚100ml充分振摇后放置,将乙醚液倾于500ml三角瓶中(水层不可倒出),再于烧瓶中加50ml乙醚振摇,放置,倾出乙醚液,同法操作六次,合并乙醚液即为亲脂性成分--总游离蒽醌,乙醚提取过的剩余物中含水溶性成分。


        2.游离蒽醌分离:


        (1)强酸性成分的分高:将上述含总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中,加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取(测5%碳酸氢钠PH值),放置使充分分层,若提取过程中乙醚挥发可补充,分出碱水溶液同法提取二次,合并碱水提取液,在搅拌下缓缓滴加6N盐酸调至pH2注意观察颜色变化,稍放置即可析出沉淀,抽滤,用水洗涤沉淀中性,将沉淀置表面器上干燥,得强酸性成分。


        (2)中等酸性成分--大黄素的分离:碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液(测5%碳酸钠水溶液的pH值)萃取5——9次,每次40ml,直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提取液,小心加盐酸调pH3,放置,抽滤,水洗沉淀至中性,抽干,干燥称重。以甲醇一氯仿或苯一氯仿(1:1)重结晶,得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。


        (3)中性成分--甾醇类化合物分离:氢氧化钠萃取过的乙醚液,用水洗至中性,以无水硫酸钠脱水,回收乙醚得残留物,以甲醇热溶二次(10ml,5ml)过滤合并甲醇液,浓缩,放置结晶,滤取沉淀并用少量石油醚洗涤,再用甲醇重结晶,得β-谷甾醇,mp136——137℃,取少许结晶,做醋酐--浓硫酸反应,观察现象。


        三、鉴定


        1.化学检识:分别取大黄素、大黄酚等少许,用乙醚溶解,做如下反应:


        A:碱液试验:取试液1ml,加20%NaOH数滴,观察颜色。


        B.醋酸镁反应:取试样1ml,加醋酸镁试剂数滴,观察现袋。


        2.薄层鉴定:


        吸附剂:硅胶-CMC


        展开剂:C6H6-EtoAc(3:2或97:9)。


        显色剂:(1)氨蒸气熏。(2)5%KOH喷雾。

        注意事项

        大黄酚和大黄素6-甲醚二者相互分离比较困难,在本实验薄层条件下为同一斑点,可用层析用磷酸氢钙进行柱层析,以石油醚洗脱,下层黄色带洗脱后,以甲醇重结晶可得大黄酚,上层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄素6-甲醚。

        常见问题

        虎杖中主要成分的结构与性质:


        1.大黄素(Emodin):橙黄色长针晶(丙酮中结晶为橙色,甲醇中结晶为黄色),mp256-257℃。几不溶于水,对于下列溶剂的溶介度分别为:四氯化碳0.01%,氯仿0.0718%,二硫化碳0.009%,乙醚0.14%,苯0.0415。易溶于乙醇,可溶于氨水,碳酸钠和氢氧化钠水溶液。


        2.大黄酚(Chrysophanol):金黄色六角型片状结晶(丙酮中结晶)或针状结晶(乙醇中结晶)。mp 196℃,能升华。易溶于乙醚、氯仿、苯、冰乙酸、乙醇, 稍溶于甲醇,难溶于石油醚,不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。可溶氢氧化钠水溶液及热碳酸钠水溶液。


        3.大黄素6-甲醚,(Emodinmonomethl ether):金黄色针晶,mp207℃,能升华。可溶于氢氧化钠水溶液,溶解度与大黄酚相似。


        4.大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷(Anthraglycosibe A):黄色针晶(稀甲醇中结晶)mp230-232℃。


        5.大黄素3-D-葡萄糖苷(Anthraglycoside B):浅黄色针晶(稀乙醇中结晶含1分子水mp190-191℃。


        6.白藜芦醇(Resveratrol):无色针状结晶,mp256-257℃,216℃升华,易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。


        7.白藜芦醇葡萄糖苷(polydotinpeceid):无色颗粒状结晶,双熔点分别为130-140℃,225-226℃,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水,可溶于乙酸乙酯、可溶于碳酸钠和氢氧化钠水溶液中,稍溶于冷水,难溶于乙醚。


        8.β-谷甾醇


        9.鞣质:属缩合鞣质,可溶于醇及水,不溶于苯、乙醚、氯仿等。


        另外。虎杖叶、茎中含少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮苷、虎杖黄酮苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷、Vtio等。

        来源:丁香实验

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