酶联免疫吸附法测定植物激素含量

1. 在ELISA中，抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现，常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。酶可直接标记激素分子，称为酶标植物激素，也可标记于第二抗体 (识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白)，称为酶标二抗。这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA_。

（1）固相抗体型ELISA：将抗激素的单克隆抗体(MAb)与已吸附于固相载体上的兔抗鼠1 g抗体(RAMIG)结合，然后加入激素标准品或待测样品,使其与固相化的MAb结合，再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记激素(酶标激素)。通过测定酶标激素的被结合量，可换算出未知样品中激素的数量。

（2）固相抗原型ELISA：将“激素-蛋白”复合物(该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白)包 被于固相载体，加入待测激素(样品或标准品)和抗IAA多克隆抗体(PAb)反应，进行竞争反 应，然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体(HRP-GARIG)与结合在固相上的PAb反应，通过测定与固相结合的酶量.换算出未知样品中激素的含量。