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        双向凝胶荧光染色与成像实验

        实验分类:

        植物学实验

        最新修订时间:

        简介

        在比较蛋白质组学中关于待测蛋白的数量、蛋白点的准确定量及其与质谱技术的兼容性研究过程中,双相凝胶电泳的染色是至关重要的一步。本章描述了多种与质谱技术兼容的用于凝胶染色的染料:考马斯亮蓝、硝酸银、Sypro Ruby、Deep Purple。本实验来源「植物蛋白质组学实验指南」〔法〕H.蒂勒门特、M.齐维、C.达默韦尔、V.米琴主编。

        来源:丁香实验

        操作方法

        双向凝胶荧光染色与成像

        3.1 可溶性总蛋白的提取方法(三氯乙酸/丙酮法) ( 1 ) 从拟南芥细胞悬浮培养液中收集细胞。 ( 2 ) 液氮中研磨细胞。 ( 3 ) 向研磨好的细胞粉末中加入提取液,在 -20℃ 放置至少 30 min ( 见注释 7) 。 ( 4 ) 42000 g 离心以除去不溶物,用洗涤液(见注释 8 ) 清洗 3 次 (见注释 8)。 ( 5 ) 将管子放置在空气中使其干燥。 ( 6

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