重组腺相关病毒载体的生产实验

AAV 介绍腺相关病毒（AAV）属微小病毒科（parvovirus），为无包膜的单链线状 DNA 病毒。只有在腺病毒或者疱疹病毒等辅助病毒协助下，宿主才能产生具有感染性的 AAV，所以 AAV 被称作腺相关病毒。典型的 AAV2 基因组约 4800bp，包括 2 个反向末端重复序列（ITR，145 bp）和两个读码框（ORF）-Rep 和 Cap（图 1）。ITR 对合成互补 DNA 链是必需的；

腺相关病毒滴度检测采用实时荧光定量 PCR 法：滴度单位：vg/mL，指每毫升中含有的病毒基因组拷贝数1、检测步骤稀释标准品质粒，设置标准品的拷贝梯度为 105、106、107、108、109、1010。配置 QPCR 反应体系，每个样品和标准品设计 3 个复孔，进行 QPCR 反应。2、 数据分析（以 HBAAV2/9 -GFP 滴度测度为例）原始实验数据。Roche LC96 实时荧光定量 P