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        纯化 DNA 实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        基因纯化,可以用于(1)对大量提取的质粒DNA进行纯化;(2)常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。

        来源:丁香实验

        操作方法

        从哺乳动物细胞或组织分离DNA

        1. 根据样品类型,从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤 2 次,用刮棒把细胞刮入约 0.5 ml 的 TBS 中,将细胞悬液转移到冰浴的离心管中,用 1 ml TBS 冲洗培养皿,并入离心管中的细胞悬液。于 4℃ 以 1500 g 离心 10 分钟以收获细胞。用 5~10 倍体积经冰预冷的 TBS 重悬细胞并再度离心。用

        基因组DNA的快速纯化

        第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中,加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K,在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液(配 25 ml)50 mmol/L Tris,pH 8 1.25 ml 1 mol/L Tris,pH 8100 mmol/L EDTA,pH8 5 ml 0.5 mol/L EDTA,pH 81

        纯化质粒(碱裂解法)

        1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心机上离心 2 分钟以沉淀大肠杆菌。吸掉培养液。4. 用 100 ul 葡萄糖缓冲液重悬沉淀物。在室温孵育 5 分钟。在这时候充分悬浮大肠杆菌对于获得尽可能大的产量是很重要的。

        🔥 磁珠法纯化 DNA

        利用独特包埋的磁珠吸附 DNA,随后在特定溶液下洗脱从而达到分离纯化 DNA 的目的。

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