四膜虫的保存实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

四膜虫的短期贮存

1. 将少许健康细胞无菌转入装有 5 ml 无菌的 0.1 mg/ml 蛋白酶胨的带旋帽的培养试管中。 2. 将试管帽旋松，在室温下垂直保存细胞。

四膜虫在保存培养基中的长期贮存

1. 在聚苯乙烯培养瓶中加入少量保存培养基。为了保持细胞适量的通气，培养基深度不应超过 0.5 cm。 2. 将少许健康细胞无菌转入含培养基的培养瓶中。 3. 轻微地旋上帽，25~26℃ 孵育。

四膜虫在大豆培养基中长期贮存

1. 在大的培养试管中装入 10 ml 蒸馏水，1 粒大豆，高压灭菌。将浑浊或水分蒸干的试管弃掉。 2. 将少许健康细胞无菌转入大豆培养基中。 3. 室温生长 1~3 天，直到靠近培养基表面有 1 层细胞。如需要，可使用抗生素和/或杀真菌剂。 4. 用约 2 ml 无菌石蜡油覆盖培养基，防止蒸发。轻微旋上帽。 5. 15~20℃ 培养，经常检查是否污染。

四膜虫的冷冻

1. 在培养基中将细胞培养至对数生长中期。如需要，可使用抗生素和/或杀真菌剂。 2. 在 pH 7.4 的 10 mmol/L Tris 中低速离心轻洗细胞 1 次，弃上清，低速离心重悬细胞，弃上清。 3. 用 10 mmol/L Tris 重悬细胞至初始体积。 4. 30℃ 孵育细胞 3 天，不振摇，使细胞饥饿。 5. 低速离心浓缩细胞，弃上清，获得细胞浓度约 4X106 细胞/ml。

冷冻四膜虫的融解

1. 将 25~50 ml 培养基预热至 30℃。 2. 将冷冻管放入 38~40℃ 的热水浴中搅拌，快速温暖细胞，直接加入一些预热的培养基。 3. 一旦沉淀层松动，将其倒入装有预热培养基的培养瓶中。 4. 30℃ 过夜孵育，中速振摇。 5. 次日检测细胞生存力。