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        人毛细血管内皮细胞的分离

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

        来源:丁香实验

        操作方法

        分离样品的制备

        1. 准备下列器械并消毒(高压灭菌,或者可能的话一次性使用): 大剪刀(两把) 刮刀(两或三把) 胰蛋白酶消化的烧瓶(每 30 g 绞碎样品一个) 带接液器的 250-μM 钢筛网 15-ml 和 50-ml 离心管 2. 分离组织样品。所有操作在层流柜中进行。 (1) 从腹整形样品分离 ① 解剖样品,去除任何皮肤、筋膜、肌肉等,只保留脂肪组织。称重样品,每 10 g 分装一份。

        偶联抗PECAM抗体的磁珠的制备

        1. 短暂振荡,使磁珠溶液均一。 2. 用 PBS 稀释 PBS/BSA(4.0 mg/ml BSA)至 BSA 终浓度 0.2 mg/ml。 3. 取 100 μl 磁珠(1 mg)加 2 ml 含 0.2 mg/ml BSA 的 PBS(20 倍稀释磁珠混合物)。混匀,用钴-钐磁体分离样品。 4. 弃上清,沉淀悬于 100 μl PBS(含 BSA 0.2 mg/ml)。 5. 磁珠偶

        偶联了抗PECAM抗体的磁珠筛选细胞

        1. 向“分离样品的制备”步骤10的细胞样品中加入 30 μl 偶联了抗 PECAM 抗体的磁珠。 2. 细胞和磁珠混合物冰上保温 15 分钟。 3. 磁体置于管侧 5 分钟,吸引筛选样品向磁体移动。小心吸弃上清,移开磁体。 4. 向磁珠中加 2 ml PBS/FCS,轻轻混匀,确保没有大的团块。用磁体重复筛选。 5. 重复步骤3和4三次。 6. 磁粒悬于 1 ml 接种培养基中。 7

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