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        染料排斥法测定细胞生存力实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        生存力分析用于检测潜在的损伤过程,如原代分离、细胞分离或冻融后活细胞的比例。

        多数生存力试验都是基于膜的完整性发生了破坏,这可通过染料的摄取来测定,这 种染料在正常情况下不能进入细胞(如台盼蓝、藻红或萘黑),或是正常时由活细胞摄 取并储留其间,此时被释放出来(如二乙酰荧光素或中性红)。然而,这种效应是瞬时的,并不是总能预示最终的存活。另外,染料排斥总是过高地估计了细胞的生存力,例 如保存在液氮中的细胞在融化后有 90% 可能排斥台盼蓝,但仅有 60% 的细胞在 24h证明能够贴壁。

        来源:动物细胞培养:基础技术指南第五版

        来源:丁香实验

        操作方法

        方案22.1 染料排斥法测定细胞生存力实验

        材料 无菌 受试细胞,如胰蛋白酶消化的贴壁细胞、融化冷冻的细胞或原代离散的细胞 合适的生长液 20ml 0.25% 胰蛋白酶 5ml D-PBSA10ml 非灭菌 血细胞计数板 生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 台盼蓝或 1% 萘黑) 巴斯德吸管 显微镜 手执计数器 操作步骤 1. 用胰蛋白酶消化或离心与重悬,制备高浓度的细胞悬液(约1X106

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