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        支原体的检测实验

        实验分类:

        细胞实验

        最新修订时间:

        简介

        支原体污染细胞后,培养基可不发生混浊,细胞病理变化轻微或不显,致难以发现。内容来源:组织培养和分子细胞学技术。(北京出版社)

        来源:丁香实验

        操作方法

        相差显微镜检测法

        1. 标本制备 用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物(长形盖片;24 小时前置入),令细胞面向上,置放在载物片上,再覆以24 mmX 36 mm的较大盖片;如不用支持物培养法,也可取少许培养液滴在载物片上,再覆以盖片法观察亦可。 2. 观察 相差显微镜油浸下观察,支原体呈暗色微小颗粒,有类似布朗运动的表现,多位于细胞表面和细胞之间。

        低涨处理地衣红染色观察法

        1. 取材 用支持物盖片培养法或培养液均可;用培养液时,先吸取培养液1 毫升,500~800 转/分,离心5 分钟后去上清,余0.2 ml备用。 2. 低涨处理 用新鲜配制的0.5 %的枸橼酸溶液,处理盖片细胞或加入到1项0.2 ml中(悬液)置10 分钟。 3. 固定 用新配制的Carnoy液固定两次,共10 分钟,取出盖片凉干;如为培养液,则应先离心弃上清固定液,

        荧光染色法

        1. 标本 盖片培养细胞汇合前从瓶中取出(如细胞已完全汇合,能影响对支原体的观察); 2. 漂洗 将细胞盖片置于碟皿中,用不含酚红的Hanks液漂洗;如为细胞悬液则先离心去上清营养液后,再加入Hanks液漂洗; 3. 固定 用醋酸甲醇(1:3)固定10 分钟; 4. 漂洗 用生理盐水或去离子水漂洗,处理方法同2; 5. 染色 置于33258

        电镜检测法

        1. 细胞培养 48~72 小时。 2. 接近汇合前,用0.05%~0.25%胰蛋白酶消化细胞5~10 分钟。 3. 用吸管轻轻吹打,制备成细胞悬液。

        培养检测法

        1. 肉汤制备 用支原体肉汤(Sigma 产)和北京生物制品所制两种均可;用前加10%马血清; 2. 培养 每45 ml肉汤培养基加2.5×106 /ml细胞悬液5 ml;培养14 天后观察肉汤培养基颜色变化; 3. 菌落培养 培养14 日后取0.5 ml加入到已冷却到50 ℃培养基中; 4. 为分离支原体进行深入研究,可用琼脂培养基做分寓培养。

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