蛋白质的短暂表达实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

三个因素令COS细胞表达系统适于高水平、短时期表达蛋白质：①转染43小时后，细胞中含SV40复制起始点的质粒达到高拷贝数；②现有许多良好的以迟细胞表达/穿按载体；③已建立多种有效转染COS细胞的简单方法。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 将目的基因亚克隆至合适的载体中得到所需的重组DNA，用小量法（5 ml 培养物）或用CsCl/溴化乙锭离心法纯化重组DNA。 2. 将在DMEM-10 CS中生长汇片的COS-7细胞（每100 mm 培养皿约细胞）在转染的前一天以1：5的比例分瓶，这样第二天细胞将长至约50%汇片的程度，让细胞在 CO2培养箱中于37℃生长过夜至约50%汇片。 3. 使用前（相应于待转染的每